各省、自治區(qū)、直轄市農(nóng)業(yè)農(nóng)村（農(nóng)牧）、畜牧獸醫(yī)廳（委、局），新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、黑龍江省農(nóng)墾總局，各有關(guān)單位:
為貫徹落實《鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略規(guī)劃（2018-2022年）》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規(guī)劃》，切實加強我國地方豬遺傳資源保護，有效應(yīng)對非洲豬瘟疫情的嚴(yán)重威脅，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司決定開展國家級地方豬遺傳材料采集保存工作。現(xiàn)將《國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案》印發(fā)你們，請按照方案要求，認(rèn)真抓好相關(guān)任務(wù)措施落實。如有不可抗力等有關(guān)情況，及時向我司畜禽種業(yè)處、全國畜牧總站反饋。
聯(lián)系人及電話：
種業(yè)管理司畜禽種業(yè)處 周曉鵬 010—59193287
全國畜牧總站畜禽資源處 張桂香 010—59194625
農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司
2019年6月17日
國家級地方豬遺傳材料采集保存工作實施方案
為貫徹落實《鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略規(guī)劃（2018-2022年）》《全國畜禽遺傳資源保護和利用“十三五”規(guī)劃》，有效應(yīng)對非洲豬瘟疫情對地方豬遺傳資源的嚴(yán)重威脅，加快國家級地方豬品種遺傳材料采集和保存，提高地方豬遺傳資源保護能力，維護地方豬遺傳資源的系統(tǒng)性和完整性，制定本方案。
一、目的意義
我國地方豬遺傳資源具有抗逆性強、耐粗飼、繁殖率高、肉質(zhì)優(yōu)良等特性，利用地方豬遺傳材料開展育種工作，有利于提高生豬種業(yè)競爭力，發(fā)展特色畜牧業(yè)，滿足城鄉(xiāng)居民多樣化、高品質(zhì)消費需求。當(dāng)前非洲豬瘟防控形勢復(fù)雜嚴(yán)峻，對地方豬遺傳資源安全造成重大威脅。采用超低溫冷凍技術(shù)，采集保存我國地方豬品種的DNA、精液、體細(xì)胞及腸道菌群等遺傳材料，是應(yīng)對非洲豬瘟疫情威脅，豐富地方豬品種保護手段，完善家畜遺傳資源保種體系，推動生豬種業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的重要途徑。
二、主要任務(wù)
（一）采集制作遺傳材料
采集制作61個國家級保種場、保護區(qū)內(nèi)國家級地方豬精液、體細(xì)胞等遺傳材料（見附件1）。每個地方豬品種收集不少于120份耳組織樣（>2克/份）；每個品種制作冷凍精液不少于15000劑（0.25mL細(xì)管）或者7500劑（0.5mL細(xì)管）；每個品種制作體細(xì)胞系不少于222份（每份1mL）：每個品種收集不少于120份健康后備豬新鮮糞便樣品。
?。ǘ?gòu)建國家級地方豬遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫
在采集遺傳材料的同時，收集供體出生日期、三代以內(nèi)系譜信息、性能測定等表型記錄數(shù)據(jù)，構(gòu)建國家級地方豬遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫。
三、任務(wù)分工
（一）全國畜牧總站。具體組織項目實施，制定遺傳材料采集制作和驗收標(biāo)準(zhǔn)，在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)、云南農(nóng)業(yè)大學(xué)等單位協(xié)助下開展技術(shù)培訓(xùn)，進(jìn)行督導(dǎo)檢查與驗收，集中保存遺傳材料，收集匯總記錄檔案。指導(dǎo)中國農(nóng)業(yè)大學(xué)構(gòu)建采集遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫，做好數(shù)據(jù)庫運行和維護等工作。
?。ǘ┍７N場（保護區(qū)）。協(xié)助開展遺傳材料采集和制作，以及病毒、細(xì)菌檢測等工作，協(xié)助提供供體三代以內(nèi)系譜（需簽字蓋章）、生產(chǎn)性能測定等數(shù)據(jù)以及正面、側(cè)面數(shù)碼照片各1張。
?。ㄈ┻z傳材料制作單位。江西農(nóng)業(yè)大學(xué)、云南農(nóng)業(yè)大學(xué)等遺傳材料采集制作單位，與全國畜牧總站簽訂安全和保密承諾書，采集制作遺傳材料并開展病毒、細(xì)菌等檢測（見附件2、3），提供檢測報告或者相關(guān)證明材料，填報相關(guān)數(shù)據(jù)（見附件4、5、6、7），按期將制作產(chǎn)品運送至國家級家畜基因庫保存。
江西農(nóng)業(yè)大學(xué)豬遺傳改良與養(yǎng)殖技術(shù)國家重點實驗室和云南農(nóng)業(yè)大學(xué)協(xié)助全國畜牧總站制定遺傳材料采集技術(shù)規(guī)范，進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo)，備份采集的遺傳材料，定期向全國畜牧總站書面匯報工作進(jìn)展。
四、進(jìn)度安排
1月至6月中旬：制定實施方案，明確參與遺傳材料采集單位的任務(wù)，與有關(guān)單位簽訂購買服務(wù)合同。
6月下旬：舉辦國家級地方豬遺傳材料采集制作培訓(xùn)班，全面啟動相關(guān)工作。
6月下旬至12月：開展遺傳材料采集制作及入庫保存工作。對各制作單位收集制作遺傳材料進(jìn)行質(zhì)量抽查。
12月底：各遺傳材料制作單位提交項目執(zhí)行情況等總結(jié)報告。
五、保障措施
?。ㄒ唬┘訌娊M織領(lǐng)導(dǎo)。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司負(fù)責(zé)總體統(tǒng)籌協(xié)調(diào)，省級農(nóng)業(yè)農(nóng)村主管部門積極協(xié)調(diào)配合本轄區(qū)內(nèi)工作。全國畜牧總站牽頭組織實施，省級畜牧技術(shù)推廣機構(gòu)、遺傳材料制作單位以及國家級地方豬保種場（保護區(qū)）、地縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門、各級種業(yè)管理系統(tǒng)等通力協(xié)作、密切配合，確保高效完成工作。
?。ǘ┮?guī)范開展工作。加強對制作單位和保種場（保護區(qū)）的培訓(xùn)指導(dǎo)，強化項目參與人員、遺傳材料、數(shù)據(jù)信息等管理，保證遺傳材料質(zhì)量與生物安全。明確所收集遺傳材料的所有權(quán)、使用權(quán)等，相關(guān)專項成果等按照國家法律法規(guī)及相關(guān)規(guī)定實現(xiàn)共享。
（三）嚴(yán)格經(jīng)費使用管理。承擔(dān)單位應(yīng)加強項目經(jīng)費管理，建立健全內(nèi)審機制，?？顚Ｓ?，明確經(jīng)費預(yù)算、使用范圍，嚴(yán)格按照預(yù)算支出。項目組織實施單位會同地方主管部門，定期不定期對項目單位的資金使用情況、執(zhí)行進(jìn)度等進(jìn)行督導(dǎo)，保障項目規(guī)范有序?qū)嵤?/p>
附件：1.任務(wù)分工表
2.國家級地方豬遺傳材料制作及質(zhì)量檢測方案
3.疫病檢測清單
4.遺傳材料采集供體登記表
5.精液采集和制作記錄表
6.體細(xì)胞制作記錄表
7.國家級家畜基因庫樣品采集記錄表 附件1
備注：1.具體任務(wù)可根據(jù)工作需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。 2.*表示該品種包括兩個或者兩個以上保護場（區(qū)）。 附件2 國家級地方豬遺傳材料制作及質(zhì)量檢測方案 一、精液冷凍保存 ?。ㄒ唬?shù)量要求 每個保種場（保護區(qū)）的每個品種保存冷凍精液不少于15000劑（0.25mL細(xì)管）或7500劑（0.5mL細(xì)管），公豬不少于6頭，涵蓋所有家系，每個個體保存冷凍精液不少于800劑（0.25mL）或400劑（0.5mL）。 ?。ǘ┕w要求 符合品種特性、特征；三代以內(nèi)無血緣關(guān)系，系譜清楚；健康、必檢疾病為陰性。 ?。ㄈ┘?xì)管標(biāo)記及包裝 應(yīng)在細(xì)管上標(biāo)明保種場（保護區(qū)）建設(shè)單位代碼、品種代碼、供體號和生產(chǎn)日期。保種場（保護區(qū)）建設(shè)單位代碼用漢語拼音大寫首字母表示，品種代碼為該品種漢字的漢語拼音大寫首字母，生產(chǎn)日期按年月日次序排列，年月日各占二位數(shù)字，年度的后兩位數(shù)組成年的二位數(shù)，月、日不夠二位的，月、日前分別加“0”補充為二位數(shù)。 細(xì)管標(biāo)記示例：
棉塞封口端 封口端 CQXK為重慶畜牧科學(xué)院代碼，RCZ為榮昌豬的品種代碼，11003為該公豬號，120525為2012年5月25日的生產(chǎn)日期。 細(xì)管裝入指形管，指形管上標(biāo)記供體豬號、冷凍精液數(shù)量及生產(chǎn)日期。再用滅菌紗布袋將裝有冷凍精液的指形管包裝起來，一個滅菌紗布袋裝一頭豬的冷凍精液，并有標(biāo)簽附在紗布袋上，放入液氮中保存。紗布袋標(biāo)簽要求標(biāo)記如下內(nèi)容：袋號、品種、供體豬號、冷凍精液數(shù)量、解凍后精子的活力。 （四）質(zhì)量檢測 1. 抽樣數(shù)量及要求 抽取總樣本量的2%進(jìn)行質(zhì)量檢測，檢測合格率要求達(dá)到80%以上。 2. 指標(biāo) （1）0.25mL劑型冷凍精液 每支劑量≥0.18mL；活力≥30%；精子畸形率≤20%；每支前進(jìn)運動精子數(shù)≥2.5×107；每支細(xì)菌菌落數(shù)≤800個。 ?。?）0.5mL劑型冷凍精液 每支劑量≥0.40mL；活力≥30%；精子畸形率≤20%；每支前進(jìn)運動精子數(shù)≥5.0×107；每支細(xì)菌菌落數(shù)≤1600個。 二、體細(xì)胞冷凍保存 ?。ㄒ唬?shù)量要求 每個保種場（保護區(qū)）的每個品種公豬不少于12頭，涵蓋所有家系；母豬不少于25頭，每個個體體外培養(yǎng)原代或第1代細(xì)胞6管，每管1mL，用1.5mL或2.0mL凍存管包裝，細(xì)胞密度為1×105/mL以上。 ?。ǘ┕w要求 符合品種特性、特征；三代以內(nèi)無血緣關(guān)系，系譜清楚；健康、必檢疾病為陰性。 ?。ㄈ├鋬龉軜?biāo)記及包裝 凍存管上標(biāo)記編號、品種漢語名稱或代碼，細(xì)胞名稱或代碼、性別、培養(yǎng)代數(shù)、凍存日期。用滅菌紗布袋將凍存管包裝起來，一個滅菌紗布袋裝2-3頭豬的凍存管，并有標(biāo)簽附在紗布袋上，放入液氮中保存。紗布袋標(biāo)簽標(biāo)記品種、供體豬號、凍存管數(shù)量。 ?。ㄋ模┵|(zhì)量檢測 1.抽樣數(shù)量。抽取總樣本量的4%進(jìn)行質(zhì)量檢測，檢測合格率要求達(dá)到70%以上。 2.指標(biāo)。細(xì)胞密度不低于1×105個/mL；細(xì)胞活力80%以上；支原體檢測為陰性。 三、耳組織及基因組DNA樣冷凍保存 每個保種場（保護區(qū)）每個品種采樣數(shù)量40頭（對所有公豬家系全部進(jìn)行采樣，繁殖公豬、繁殖母豬各1頭，以及后備公豬和后備母豬各1頭，且后備豬避免全同胞關(guān)系）。每個品種每個個體采集3份耳樣，每份耳組織樣不少于2克（用2 ml凍存管保存），凍存管上詳細(xì)標(biāo)注品種、耳號、性別、采樣日期、場地等關(guān)鍵信息。耳樣采集后立即置于液氮中保存。 四、腸道菌群冷凍保存 ?。ㄒ唬?shù)量要求 每個保種場（保護區(qū)）每個品種公豬不少于10頭，母豬不少于50頭，每頭豬采集糞便樣本2份（每份2克）。 ?。ǘ┕w要求 60日齡后備豬，符合品種特性、特征；三代以內(nèi)無血緣關(guān)系，系譜清楚；近一個月沒有使用抗生素、食欲正常、體重達(dá)該品種60日齡階段標(biāo)準(zhǔn)。 ?。ㄈ﹥龃婀軜?biāo)記及包裝 凍存管上標(biāo)記編號、品種漢語名稱、性別、采樣日齡、采樣日期。 ?。ㄋ模┎蓸右蠛头椒?/p> 1．采樣要求 ?。?）每頭豬采集新鮮糞便樣本2份（每份2克），其中一份用2.0 mL凍存管包裝后立即投入液氮或-80℃保存，另一份用5.0mL凍存管取1克新鮮糞便置于3.0 mL 含20%甘油和5%蔗糖的保護液中，液氮或-80℃保存。 ?。?）采樣用凍存管要求無菌，配置的含20%甘油和5%蔗糖的保護液無菌。 ?。?）從肛門采集新鮮糞便樣品，采樣時每頭豬要更換新的手套，防止交叉污染。 2.糞便樣品采集和保存方法 ?。?）采樣前準(zhǔn)備。①2 mL和5 mL凍存管高壓滅菌（或直接購買無菌凍存管）；②配置75%乙醇；③冷凍保護液配置：以配置100mL保護液為例：無菌生理鹽水中加入20 mL甘油和5g蔗糖，混勻、定容到100 mL。④液氮或干冰；⑤其它耗材：一次性手套、紙巾等。 （2）樣品采集。①固定采樣豬，用紙巾和75%乙醇擦洗肛門；②換上一次性手套，從肛門采集糞便樣品；③從采集的糞便團塊中，取中間部分糞便2克裝入2 mL凍存管，擦拭干凈凍存管，在管壁標(biāo)記耳號、性別、采樣如期和年齡，立即投入液氮中；④另取中間部分糞便1克裝入放有3 mL保護液的凍存管中，混勻，在管壁標(biāo)記耳號、性別、采樣如期和年齡，投入液氮中。⑤在液氮中保存，或送至實驗室后轉(zhuǎn)移到-80℃。⑥樣品運輸郵寄可用干冰。 附件3 疫病檢測清單
備注：1-5為必檢測項目，6-17為選測項目。 附件4 遺傳材料采集供體登記表 保種場（區(qū)）： 時間： 年 月— 年 月 共 頁 第 頁
有系譜者不用填寫，來源：填寫省（市）、縣、鄉(xiāng)、村；親緣關(guān)系：填寫與收集了遺傳物質(zhì)的其他個體的親緣關(guān)系，如和“XXX”“父子”或“同父”“同母”...有親緣關(guān)系但不清楚的填寫“有”，沒有親緣關(guān)系填寫“無”，親緣關(guān)系不清楚填寫“不清楚”。 全國畜牧總站國家家畜基因庫制 附件5 保種場（區(qū)）名稱： 品種： 共 頁 第 頁
全國畜牧總站國家家畜基因庫制 附件6 體細(xì)胞制作記錄表 保種場（區(qū)）名稱： 品種： 共 頁 第 頁
全國畜牧總站國家家畜基因庫制 附件7 國家家畜基因庫
樣品采集記錄表 品種名稱： 保種場（區(qū)）： 采樣量： 采樣人員： 采樣時間：
注：1. 采樣編號：品種代碼（三位）和順序號（二位），其中品種代碼為該品種漢字的漢語拼音大寫首字母，順序號不足位數(shù)用“0”補齊。 2. 類別：指能繁母豬、種公豬、后備公豬或后備母豬。 3. 樣品類型：指耳組織或血液。  附件：農(nóng)種畜函〔2019〕14號-農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司關(guān)于印發(fā)《國家級地方豬品種遺傳材料采集保存工作實施方案》.pdf |
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